苗木組織培養的理論依據是細胞的全能性。 細胞的全能性是指苗木的每個具有完整細胞核 的細胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具 備發育成完整苗木的遺傳能力。在適宜條件下， 任何一個細胞都可以發育成一個新個體。在植 物個體生長發育過程中，一個受精卵可產生具有 完整形態和結構、機能的苗木，同樣，苗木的體細 胞也具備遺傳信息的傳遞、轉錄和翻譯的能力。 在一個完整苗木上某部分體細胞只是表現一定 的形態1具有一定的功能，這是由于它們受到具 體器官和組織所在環境的束縛，其遺傳力并沒有 喪失。體細胞一旦脫離原來所在的器官或組織， 成為離體狀態時，在一定的營養、激素和環境條 件的作用下，就表現出全能性，而生長發育成完

當土中壓條形成良好的根系后，切離母株。對剛分離的新苗木要刪除部分枝葉，并注意保護、灌水、遮陽等。整的苗木。

苗木生長調節劑在苗木組織培養中起著十分重要的調控作用，是培養基中的關鍵性物質。苗木生長調節劑包括生長索、細胞分裂素及赤霉素等，它們在組織培養中具有不同的作用。

6.4.2苗木組織培養的類型與應用

6.4.2.1組織培養的類型

組織培養的離體材料稱為外植體.根據其外 植體來源及特性不同,.苗木組織培養可分為： 0苗木培養：幼苗及較大的完整苗木的 培養；

②胎胚培養：包括原胚和成熟胚培養，即 胚、胚乳、胚珠、珠心、子房培養及試管受精等；

③器官培養:包括根、莖、葉、花及果實等構 成苗木體的各種器官的離體培養；

④愈傷組織培養:從苗木各個部分來的離 體材料，增殖而形成的愈傷組織的培養；

⑤組織培養:構成苗木體的各種組織的離 體培養，如分生組織、輸導組織、薄壁組織等離體 組織的培養；

⑥細胞培養:包括單細胞、多細胞或懸浮細 胞的培養；

⑦原生質體培養。

根據培養的操作方式不同，又可分為固體培 養和液體培養。液體培養又有振蕩培養、旋轉培 養和靜止培養等。

6.4.2.2組織培養的應用

近年來，隨著組織培養技術的不斷發展，其 應用的范圍也日益廣泛。它的應用領域主要有 以下幾個方面：

無性系的快速、大量繁殖組織培養與傳統的無性繁殖相比，工作不受季節限制，而且經過組織培養進行無性繁殖.，具 有用材少、速度快、增殖率髙等特點。如采用莖 尖培養的方法，一個蘭花的莖尖一年內可育成 400萬個球莖，一個草莓莖尖一年內可育出成苗

000萬株。在苗木組織培養技術研究的基礎上 發展起來的苗木快速繁殖方法,近年來發展十分 迅速，快速繁殖的物種越來越多，到目前為止已 有幾千種。如蘭花、馬鈴薯、柑橘、香蕉、菠蘿、香 石竹、馬蹄蓮、玉簪等多種園林苗木，均已采用組 織培養進行快速繁殖。組織培養雖然有用材少、 增殖率高的優點，但成本較高，一般在母株材料 少而需短時期內大量增殖和培育脫毒苗時才應 用，如母株材料多且沒有退化時,還是以傳統繁 殖方法為宜。

苗木育種

在園林苗木育種上，應用很廣泛，主要在胚 胎培養、單倍體育種、體細胞雜交和苗木基因工 程等方面應用較多。通過組織培養,可縮短育種 年限和世代，也有利于基因突變中隱性突變的 分離。

苗木的提純復壯

運用組織培養，苗木的復壯過程很明顯，對于長期運用無性方法繁殖并開始退化的苗木品種，如康乃馨可采用組培方法繁殖，可使個體發育向年輕階段轉化。

培育無病毒苗木

一些用無性繁殖方法來繁殖的苗木種類，如 康乃馨、菊花、郁金香、水仙、百合、鳶尾等，不能 通過種子途徑去除病毒。由于利用苗木體的一 部分繁殖，易導致病毒積累，危害加重，影響了園 林苗木的觀賞效果。而苗木在莖尖生長點區幾 乎不含或含極少病毒，因為該區無維管束，病毒 難以進入，所以莖尖培養成為獲得無病毒苗木的 重要途徑。

種質資源的保存

很多無性繁殖的苗木因沒有種子供長期保 存，其種質資源傳統上只能在田間種植保存，耗 費人力物力，且資源易受人為因素和環境因素而 丟失。而用組培方法，不僅可以在較小的空間內 保存大量的種質資源，而且具有較高的繁殖系 數，還能避免外界不利氣候及其他栽培因素的影 響，進行常年保存，在保存過程中，不受昆蟲、病 毒和其他病原體的影響,可大大節省人力、物力， 大大延長保存期。

另外，還應用在繁殖材料的長距離寄送和無性系材料的長期貯藏，細胞次生代謝物的生產和生物制藥工業，遺傳學和生物學基礎理論的研究等。

6.4.3組織培養條件

6.4.3.1組培室的建立

組培實驗室包括三個部分:準備室、接種室、

培養室。

準備室

準備室要求面積適當大些，而且要明亮，通 風。準備室的工作內容較多，器皿的洗滌、培養 基配制、分裝、高壓滅菌,椬物材料的預處理，蒸 餾水、無菌水的制備以及進行生理、生化因素的 分析，試管苗出瓶、清洗與整理工作等均在準備 室中進行，還有藥品的存放、天平的放置等。準 備室應有相應的設備，如工作臺、柜櫥、儀器、藥 品柜、冰箱、水池等。

接種室

接種室主要用于無菌條件下工作，也稱無 菌操作室或無菌室，其面積大小視生產規模而 定，要求干爽安靜、清潔明亮，使室內保持良好 的無菌或低密度有菌狀態。接種室主要用作接 種材料的滅菌和接種，無翦材料的繼代,叢生苗 的增殖或切割嫩莖插植生根等，是苗木組織培 養研究或生產中最關鍵的部分。室內主要設備 有超凈工作臺、紫外燈和各種無菌的接種工 具等。

培養室

培養室是將接種到培養瓶等器皿中的苗木 材料進行培養的場所，主要有培養架，控溫、控光 設備等。培養架可分4〜5層，上面安裝30〜 40 -光燈照明，每天照明10〜16比用自動定 時器控制。溫度最好保持在15〜251,為使室 內溫度均衡一致，需要安裝.自動調節溫度設備， 一般安裝空調機。此外還可根據需要安置液體 培養所需的搖床、轉床等。

6.4.3.2儀器設備和器皿用具

(1)儀器設備

①天平。包括藥物天平、扭力天平、分析天 平和電子天平等。大量元素、糖、瓊脂等的稱量可 采用精度為0. 1 g的藥物天平;微量元素、維生 素、激素等的稱跫則應采用精度為0. 001@的分 析天平。有條件的，最好配用精度為0.000 1 8的 電子天平。

②酸度計。用于校正培養基和酶制劑的 pH值。也可用pH為5. 0〜7. 0的精密試紙來 代替。

@蒸餾水發生器。組織培養所用的蒸餾水 可用金屬蒸餾水發生器大批制備，重蒸餾水可用 硬質玻璃雙蒸餾水器制備。

④烘箱和恒溫箱。洗凈的玻璃器皿需要迅 速烘千，也可以進行高溫（160〜1800千熱滅 菌。測定培養物的干重時，可用80^0烘干，稱 重。恒溫箱可用于分離原生質體與酶制劑的保 溫，也可用于組織培養材料的保存和暗培養；裝 上熒光燈后還可進行溫度和光照實驗。

⑤冰箱。用于在常溫下易變性或失效的試 劑和母液的儲藏，細胞組織和試驗材料的冷凍保 藏，以及某些材料的預處理。

⑥高壓蒸汽滅菌鍋。用于培養基、無菌水 和接種器械的滅菌消毒等，是組織培養中最基本 的設備之一。

⑦超凈工作臺。組織培養中最通用的無 菌操作裝置。一般由鼓風機、濾板、操作臺、紫 外燈和照明燈等部分組成。超凈工作臺的空氣 通過細菌過濾裝置，以固定不變的速率從工作 臺面上流出，在操作人員與操作臺之間形成風 幕。根據風幕形成的方式，可分為垂直式和水 平式兩種。

⑧水浴鍋。用于溶解難溶藥品和瓊脂。

⑨搖床與轉床。進行液體培養時用。

⑩空調機。通過升溫及降溫來保持培養室 溫度的相對恒定。

⑪除濕機。用于改善培養室的濕度。

⑰離心機。用于分離培養基中的細胞及解 離細胞壁后的原生質體。一般用3000的離心機即可。

(2)玻璃器皿及用具

苗木組織培養所需的玻璃器皿和用具可根 據各項研究和生產工作的需要而定。常用的玻 璃器皿和用具主要有以下幾種：

①培養器皿。用于裝培養基和培養材料， 要求透光度好，能耐高壓滅菌。常用的有試管、 三角瓶、廣口瓶、圓形培養瓶、培養皿等。

②分注器。用于將配制好的培養基按一定 量注人到培養器皿中。

③離心管。用于離心，將培養的細胞或制 備的原生質體從培養基中分離出來，并進行 收集。

④刻度移液管。角于準確童取少量的 溶液。

⑤實驗器皿。用于配制培養基、儲藏母液、 材料滅菌等，主要有燒杯、量筒.、量杯、吸管、滴 管、容量瓶、稱量瓶、試劑瓶、玻璃瓶等各種化學 實驗器皿。

⑥器械用具包括鑷子、剪刀、解剖刀、接種 針、接種鉤、接種鏟等